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Bbs1酶切 酶切是水浴好还是pcr仪好

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Bbs1酶切

酶切是水浴好还是pcr仪好

  酶切是dpcr仪好的。

  在pcr仪里。建议使用PCR仪进行。水浴锅等常规仪器对温度控制不精确(尤其37℃),影响重组效率。

  PCR仪是一种通过PCR(聚合酶链式反应)技术,对特定DNA进行扩增的仪器。

Bbs1酶切

  bbs1酶切温度为37摄氏度,反应温度过高或过低都会影响酶活性,甚至导致酶的失活,只有在最适温度下,酶活最高。

  酶切是对粘末端的DNA分子和载体分子进行切割,以获得相应的粘末端连接。

  酶切可以是单酶切也可以是双酶切。

  单酶切操作比较简单,但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同或反应温度不同,这时可以采用如下措施解决:

  1、先用一种酶切,然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切。

  2、先进行低盐要求的酶切,然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求,加入第二种酶进行酶切。

  3、使用通用缓冲液进行双酶切,具体要根据酶的反应要求进行,尽量避免活力损失。

我是用BbsⅠ酶酶切PX458质粒,请问酶切时间和比例该怎么控制

  如果你是测紫外定浓度,来判断酶切是否完全,这个方法是不靠谱的。

  只能大致判断你的回收效率。

  要验证是否酶切完全,一是看跑胶时的条带数(也不完全靠谱,比如少量质粒没切开,但形成的条带弱,看不见),二是通过连接转化实验,看其自连情况如何。

  想把质粒切好,主要是把酶切实验做好,时间、温度、酶量控制好。

  祝实验顺利!

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