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260/230比值的含义,dna260/280比值的含义
OD260/280比值指260nm和280nm下吸光光度比值。
OD是optical density(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度, OD=lg(1/trans),其中trans为检测物的透光值。
一般来说OD260代表核酸的吸光度,OD280代表蛋白质的吸光度。
A260/A280与OD260/OD280的意思是一样的。
A代表吸光值,而OD是光密度值,一个意思。
1、纯DNA:OD260/OD280≈1.8(>1.9,表明有RNA污染;
<1.6,表明有蛋白质、酚等污染)符合要求的纯度较高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之间,低于此范围表明蛋白质含量超标,高于此范围表明样品中含有RNA。
2、纯RNA:OD260/OD280≈2.0(<1.7时表明有蛋白质或酚污染;
>2.0时表明可能有异硫氰酸残存)。
符合要求的纯度较高的纯化RNA其OD260/OD280在1.7-2.0之间,低于此范围表明样品中有蛋白质或苯酚,如果比值能达到1.9-2.0,RNA的纯度就已经很高了。
260/280、260/230 含义
4. A320nm或A340nm
为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。
该值应该接近0.0。
如果不是,标明溶液中有悬浮物,需要纯化样品。
纯样品的A320一般是 0。
5. A260/A280和A260/A230
是核酸纯度的指示值。
纯度好的DNA或RNA,在pH7-8.5 下A260 / A280的比值应该在2.0 或2.5。
纯净的样品比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。
如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物、盐(胍盐)等,较纯净的核酸A260/A230的比值 大于2.0 。
当 0.5%BSA蛋白质漏樱污染时,蛋白污染会导致260和280的数值都下降,其净结果是260/280比值下降,但260/280的比值变化并不显著,正如 分子克隆3所说。
但蛋白残留会导致230的数值显著上升,显著影响260/230的比值。
也就是说,如果RNA样品的260/280=1.7,返慎丛260 /230=0.5,那么就应该考虑污染原因不是胍盐残留,而是蛋白残留.
酚的最大吸收峰在270。
酚的残留会显著的增加230、260和280的数值,孝灶同时酚的吸收峰与核酸的吸收峰合并后,最大吸收峰向270方向偏移, 也就是说最大吸收峰在270附近。
也就是说,如果RNA样品的260/280=1~1.5, 260/230=1~1.5,那么污染原因就应该考虑是酚残留。
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